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IMMUNOTERAPIA

Leucemia (2023)Citare questo articolo

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Nel trapianto aploidentico HLA, le cellule T regolatorie (Tregs) co-infuse con le cellule T convenzionali (Tcons), proteggono dalla malattia del trapianto contro l'ospite (GvHD) mantenendo l'effetto del trapianto contro la leucemia (GvL) [1,2,3] . La prevenzione della GvHD potrebbe essere dovuta alla downregulation dipendente da CTLA-4 di CD80/CD86 sulle cellule dendritiche (DC) [4] mentre l'effetto GvL potrebbe essere collegato alla capacità delle Treg di ridurre l'espansione delle cellule T, ma non la loro attivazione [ 5]. Qui, abbiamo descritto la localizzazione selettiva delle Treg CD161+ nel midollo osseo dei pazienti trapiantati. Questa popolazione, già descritta come capace di produrre citochine proinfiammatorie [6], potrebbe essere fondamentale per lo sviluppo di un microambiente in grado di mantenere un effetto GvL. Sono stati reclutati 20 pazienti (metodi supplementari) e hanno ricevuto un aplo-HSCT con 2 × 106/kg Treg, 1 × 106/kg Tcons e una megadose di cellule CD34+ [1,2,3]. Campioni di sangue periferico (PB) e midollo osseo (BM) sono stati raccolti a 1, 3, 6 e 12 mesi dopo il trapianto.

Le DC BM e PB sono state analizzate su BD FACS Lyric System (BD Biosciences, La Jolla, CA), utilizzando gli anticorpi elencati nella Tabella supplementare 1. Le DC sono state selezionate utilizzando anti-CD123 (per DC plasmacitoidi, pDC) e anti- Abs CD11c (per DC mieloidi, mDC) (Tabella supplementare 1) e analizzati, mediante RT-PCR in tempo reale, per l'espressione di indoleammina 2,3-diossigenasi 1 (IDO-1), interleuchina (IL) -6, IL -10, Ligando di morte programmata 1 (PD-L1) e Fattore di crescita trasformante Beta 1 (TGFB1) (Tabella supplementare 2). Le DC BM- e PB-CD11c+ sono state raccolte dai pazienti e coltivate in co-coltura con cellule CD3+ autologhe. Per generare Treg CD161+, le cellule sono state purificate dal PB di donatori sani (HD), coltivate con IL-2, IL-6 e TGF-β e utilizzate per test funzionali (vedere Metodi supplementari).

Sono stati eseguiti il ​​t-test di Student e l'analisi ANOVA, seguiti dal test di confronto multiplo di Tukey e Sidak. Tutti i test statistici sono stati valutati a un livello α di 0,05, utilizzando Stata, versione 13 (StataCorp, College Station, TX, USA; RRID:SCR_012763) e il software GraphPad Prism, versione 9 (RRID: SCR_002798, San Diego, CA, USA) .

L'esito clinico dei pazienti arruolati (GvHD; tasso di recidiva; TRM) era in linea con i dati pubblicati [3]. Tutti i pazienti arruolati avevano chimerismo completo del donatore. L'analisi citometrica a flusso ha rivelato che la percentuale di mDC era significativamente più alta nei campioni BM (intervallo: 0,16–2,03%) rispetto ai campioni PB (intervallo 0–0,18%) nel primo mese dopo il trapianto (Fig. 1A). Gli mDC derivati ​​dal BM esprimevano livelli più elevati del recettore costimolatorio CD86 (intervalli MFI PB: 411–548; BM: 603–859) 12 mesi dopo il trapianto (Fig. 1B). Non sono emerse differenze nei pDC. La RT-PCR ha mostrato che, nelle PB-mDC, l'espressione di IL-6 e TGF-β è gradualmente diminuita dopo il trapianto, mentre è rimasta quasi invariata nelle BM-mDC (Fig. 1C, D). Per questo motivo, dopo dodici mesi dal trapianto, la secrezione di IL-6 nei PB-mDC era significativamente inferiore rispetto ai BM-mDC (Fig. 1C). D'altra parte, l'espressione del regolatore del checkpoint immunitario PD-L1 è rimasta estremamente elevata nei PB-mDC, rispetto ai BM-mDC (Fig. 1E). Ciò indica la presenza di una firma immunosoppressiva nei PB-mDC. L'espressione delle molecole costimolatorie e dei checkpoint immunitari era simile a quella di Carenza et al. [7].

A La percentuale di mDC era più alta nel BM che nel PB, nel primo mese dopo il trapianto (*t-test di Student: p < 0,05). B Gli mDC derivati ​​da BM esprimevano livelli più elevati del recettore costimolatorio CD86 (mostrato come valori MFI), rispetto agli mDC derivati ​​da PB (**T-test di Student: p <0,01). C, D La RT-PCR in tempo reale ha mostrato la graduale diminuzione dell'espressione di IL-6 e TGF-β, dopo il trapianto, nelle PB-mDC, mentre i loro livelli nelle BM-mDC rimangono stabili. (*T-test di Student: p < 0,05). E La RT-PCR in tempo reale ha mostrato livelli di PD-L1 significativamente più alti nelle PB-mDC rispetto alle BM-mDC (*Test t di Student: p < 0,05; ***Test t di Student: p < 0,001). Tutti i dati (A–E) sono rappresentati come media ± DS. F Le percentuali di cellule T CD3+, CD4+ e CD8+ erano comparabili (t-test di Student: p > 0,05) tra BM e PB e tra le fasi di follow-up precoce e tardiva (ANOVA: p > 0,05). I dati sono rappresentati come media. G Pannello sinistro. Le cellule T CD8+ derivate da BM hanno mostrato un'espressione più elevata del recettore costimolatorio CD28 rispetto alle cellule T CD8+ derivate da PB (30,3% ± 18,8 vs 9,2% ± 4,9; *t-test di Student: p < 0,05). I dati sono rappresentati come media ± DS. Pannello destro. L'espressione dell'inibitore del checkpoint immunitario PD-1 era significativamente più alta nei CD4+ derivati ​​da PB (69% ± 29 vs 24% ± 11; *T-test di Student: p < 0,05) e CD8+ (65% ± 25 vs 4% ± 3; *T-test di Student: p <0,05) cellule T rispetto ai linfociti T derivati ​​dal midollo osseo. I dati sono rappresentati come media ± DS. Le co-colture di H CD3+/CFSE+-mDC hanno mostrato un tasso di proliferazione delle cellule T che era significativamente più alto quando le cellule T venivano coltivate in presenza di BM-mDC (25% ± 7,2 vs 6,7% ± 8,7; *T-test di Student: p < 0,05 ). I dati sono rappresentati come media ± DS di 3 esperimenti indipendenti.